1. CRISPR-Based EGE技术简介
CRISPR(clustered,regularly interspaced,short palindromic repeats)是一种来自细菌降解入侵的病毒DNA或其他外源DNA的免疫机制。在细菌及古细菌中，CRISPR系统共分成3类，其中Ⅰ类和Ⅲ类需要多种CRISPR相关蛋白（Cas蛋白）共同发挥作用，而Ⅱ类系统只需要一种Cas蛋白即可，这为其能够广泛应用提供了便利条件。目前，来自Streptococcus pyogenes的CRISPR/Cas9系统应用最为广泛。
Cas9蛋白（含有两个核酸酶结构域，可以分别切割DNA两条单链。Cas9首先与crRNA及tracrRNA结合成复合物，然后通过PAM序列结合并侵入DNA，形成RNA-DNA复合结构，进而对目的DNA双链进行切割，使DNA双链断裂。
由于PAM序列结构简单（5’-NGG-3’），几乎可以在所有的基因中都能找到大量靶点，因此得到广泛的应用。CRISPR/Cas9技术已经成功应用于植物、细菌、酵母、鱼类及哺乳动物细胞，是目前最高效的基因组编辑技术。
通过基因工程手段对crRNA和tracrRNA进行改造，将其连接在一起得到sgRNA（single guide RNA）。融合后的RNA具有与野生型RNA类似的活力，但因为结构得到了简化，更方便研究者使用。通过将表达sgRNA的元件与表达Cas9的元件组装到一个载体中，得到可以同时表达两者的质粒，将其转染细胞，就能够对目的基因进行操作。
目前的CRISPR/Cas9技术应用于基因敲入时，外源DNA同源重组效率一直很低。为提高其重组效率，百奥赛图在CRISPR/Cas9技术基础上开发和优化出一套高效的基因敲除/敲入技术（Biocytogen Extreme Genome Editing System，简称EGE技术）。该技术比普通的CRISPR/Cas9技术介导的同源重组效率提高了10-20倍，从而使得基因改造更加快速和方便。利用EGE技术几乎可以在基因组中的任意位点，对DNA序列进行各种精确地编辑，从而实现条件性基因敲除、全基因敲除、基因敲入及点突变的目的。2015年9月，百奥赛图成功注册“EGE”商标 。
2. CRISPR-Based EGE系统制备模式动物流程图
3.服务流程
百奥赛图提供一站式定制化小鼠模型构建服务，包括模型设计、构建及基因型鉴定服务
3.1 项目的可行性评估及模型设计
百奥赛图拥有一支专家级技术团队，专门负责对项目的可行性进行全面分析，并提供完全免费的专业模型设计服务，服务的内容包括：
明确模型构建的目的
分析目的基因的结构与序列组成信息
分析已有文献数据
设计出所有可能的模型构建方案
分析所有模型构建方案的优势与风险
精确的项目实施时间表及项目报价
3.2打靶载体的设计与构建
课题设计，合成引物
CRISPR/Cas9质粒构建
sgRNA 活性检测
打靶载体构建
CRISPR/Cas9体外转录制备mRNA
3.3原核注射
小鼠受精卵注射 CRISPR/Cas9 mRNA
3.4获得F0代鼠并繁殖
移植受体母鼠的饲养与F0出生
嵌合鼠与野生小鼠的合笼交配
3.5获得种系遗传的F1代杂合小鼠
F1代小鼠的出生
F1代小鼠的鼠尾基因型鉴定确认种系遗传
3. CRISPR-Based EGE技术优势
高速度：最快2个月即可得到F0代阳性鼠,5个月得到F1
零风险：强大的生产平台支持，课题失败全额退款
高效率：比现有的CRISPR/Cas9介导的基因重组效率提高20倍
高质量：坚持Southern blot，最大限度降低由于随机插入造成的后续实验风险
多样化：全基因敲除、条件性基因敲除、基因敲入等
无物种限制：细胞系，小鼠，大鼠，猪，猴，斑马鱼等
4.应用
4.1.基因敲入大鼠
2014年2月，百奥赛图利用EGE技术成功开发出了CD4-dsRed和FoxP3-DTR-EGFP报告基因敲入大鼠。到目前，公司承接国内外委托定制的基因敲除大鼠、条件性敲除大鼠及基因敲入大鼠模型70余种，标志着公司在基因敲除/敲入大鼠模型开发的新技术研发方面，已处于国内领先和国际前沿的地位。利用EGE技术，百奥赛图已经为客户制备了基因敲入大/小鼠200余种。
4.2.基因敲入细胞系
利用EGE技术，百奥赛图制备了在ACTB（细胞骨架丝状蛋白）基因编码框翻译起始位点敲进EGFP（融合蛋白）的U2OS细胞系，以及在LMNB1（核膜蛋白）基因编码框起始位点敲进EGFP（融合蛋白）的大鼠C6细胞系。
利用流式细胞术分析重组效率发现，在U2OS细胞系中，CRISPR/Cas9介导的EGFP-ACTB基因敲进效率只有1.91%，而EGE可以达到15.02%，提高了约8倍。在C6细胞系中，EGE技术将EGFP-LMNB1的敲进效率从0.19%提升至3.6%，提高了约19倍。